خالص سازی و تعیین ویژگی های بیوشیمیایی آنزیم های پروتئاز و لیپاز کرم گلوگاه انار ectomyelois ceratoniae

پایان نامه
چکیده

کرم گلوگاه انارectomyelois ceratoniae zeller (lepidoptera: pyralidae) از آفات مهم انار و پسته در ایران است. فعالیت پروتئازی و لیپازی در روده میانی لارو سن پنج e. ceratoniae برای به دست آوردن نوع پروتئاز و ویژگی آنها جهت استفاده در روش های مدیریتی کنترل آفت مورد بررسی قرار گرفت. فعالیت پروتئولیتیکی وجود پروتئینازهای الاستاز، تریپسین و کیموتریپسین و دو اگزوپپتیداز را اثبات کرد. دمای بهینه در فعالیت پروتئولیتیکی کل با استفاده از آزوکازئین و کازئین به عنوان سوبسترا به ترتیب 30 و 35 درجه سلسیوس به دست آمد. در صورتی که در مورد هموگلوبین در محدوده دمایی 15 تا 35 درجه سلسیوس مشاهده شد. کاتیون های مختلف نه تنها باعث افزایش بلکه بعضی از آنها باعث کاهش شدید فعالیت پروتئولیتیکی شدند، هر چند sds، اسید سیتریک و مرکاپتواتانول به طور معنی داری باعث کاهش شدند. استفاده از بازدارنده های اختصاصی شامل: pmsf، tlck، tpck، e-64، dtt و فنانترولین وجود سرین پروتئینازها را به عنوان پروتئاز اصلی اثبات کرد، که پروتئازهای تریپسین مانند به طور قابل ملاحظه ای از سایرین فعال تر بودند. برای توسعه استراتژی های بهتر کنترل، خالص سازی و بررسی ویژگی های پروتئاز تریپسین مانند به وسیله ژل فیلتراسیون و کروماتوگرافی تبادل یونی به دست آمد، که ضریب خالص سازی 35/23، بازیابی 04/27، فعالیت اختصاصی u/mg protein 07/66 و وزن ملکولی 8/35 کیلودالتون محاسبه شد. خصوصیات بیوشیمیایی پروتئاز خالص شده بیشترین فعالیت آنزیمی را در اسیدیته 9 و دمای بهینه 20 نشان داد. همچنین، بازدارنده پروتئیناز از چهار رقم انار استخراج شد که رقم های بریت، می خوش، ترش سبز و شیرین دارای اثر بازدارندگی روی تریپسین بودند. خالص سازی لیپاز نیز به وسیله سولفات آمونیوم و دو ستون کروماتوگرافی صورت گرفت، که میزان پروتئین u/mg 4/0، فعالیت اختصاصی u/mg protein 62/29، بازیابی 57/28 و وزن ملکولی 25 کیلودالتون محاسبه شد. اسیدیته و دمای بهینه لیپاز خالص شده به ترتیب 7 و 30 درجه سلسیوس به دست آمد. همچنین آنزیم به مدت 3 ساعت در دمای 30 درجه سلسیوس پایدار بود. غلظت های مختلف pmsf و edta با لیپاز خالص شده انکوبه شدند که edta هیچگونه اثر بازدارندگی نداشت، اما pmsf به طور معنی داری فعالیت آنزیمی را کاهش داد که در ژل الکتروفورز نیز مشاهده شد.

منابع مشابه

مطالعه نوسانات جمعیت کرم گلوگاه انار، Ectomyelois ceratoniae Zeller و کرم به، Euzophera bigella Zeller، در باغ های انار لرستان

کرم گلوگاه انار، Ectomyelois ceratoniae Zeller و کرم بـه Euzophera bigella Zeller، از مهمترین آفات میوه­خوار بوده که باعث کاهش کمی و کیفی میوه­ های انار می‌شوند. تله­ های فرومون جنسی حشرات می‌توانند یک برآورد واقعی از نقطه شروع تا پایان ظهور پروانه‌ها، دوره فعالیت پروازی و نیز مهاجرت آن­ها را فراهم کنند. به­ همین منظور تحقیقی در باغات به منطقه تنگ سیاب کوهدشت (لرستان)، در طی سال 1390 انجام گرفت...

متن کامل

کاربرد فناوری هسته‌ای جهت تعیین دز کنترل‌کننده کرم گلوگاه انار، (Ectomyelois ceratoniae Zeller (Lep.: Pyralidae

کرم گلوگاه انار، (Ectomylois ceratoniae Zeller (Lepidoptera: Pyralidae، از مهمترین عوامل کاهش کمی و کیفی محصول انار ایران می­باشد. استفاده از روش نابارورسازی در دنیا یکی از روش­های کنترل آفات مختلف با شرایط خاص است. به­منظور ارزیابی کنترل کرم گلوگاه­ انار با استفاده از روش هسته­ای، نابارورسازی انجام شد. جهت پرورش حشره از جیره غذای مصنوعی در شرایط حرارتی 2±28 درجه سانتی­گراد، رطوبت نسبی 5±60 درص...

متن کامل

بررسی فعالیت همولیتیک عصاره های بدن کرم گلوگاه انار (Zeller) (Lepidoptera: Pyralidae) Ectomyelois ceratoniae

پپتیدهای ضد میکروبی (AMPs) به عنوان یک کلاس جدید از عوامل ضد میکروبی مورد توجه قرار گرفته‌اند، چرا که AMPs طیف وسیعی از گونه ها، از جمله باکتری ها، قارچ ها و ویروس ها را می‌کشند. یکی از مشکل کاربرد آنها به عنوان نمونه، فعالیت همولیتیک AMPs است. همولیز تخریب نا‌بهنگام گلبول‌های قرمز است. برای تعیین اثر همولیتیک یک ترکیب آزمایشی از تست همولیز استفاده می‌شود. فعالیت همولیتیک باید در فرآیند شناسایی...

متن کامل

استخراج و شناسایی فرومون جمعیت‌های مختلف شب پره کرم گلوگاه انار، Ectomyelois ceratoniae

کرم گلوگاه انار، Ectomyeloisceratoniae Zeller، مهم­ترین آفت باغ­های انار در ایران و سایر کشورهای تولید کنننده این میوه است که سالانه خسارت زیادی به محصول انار وارد میکند. این آفت قلمرو خود را به قاره­های جدید جهان توسعه داده است و آفت اصلی خرما در ایالات متحده محسوب می­گردد. ولی این آفت در ایران تاکنون از روی خرما گزارش نشده ولی مهم­ترین و اقتصادی­ترین آفت انار است.با توجه به عدم کارایی مبارزه ...

متن کامل

تعیین زمان مناسب پوشش تاج میوه جهت کنترل کرم گلوگاه انار، (Ectomyelois ceratoniae Zeller (Lep.: Pyralidae

کرم گلوگاه انار، (Ectomyelois ceratoniae Zeller (Lep.: Pyrallidae، از آفات مهم درخت انار است که ضمن تغذیه از میوه، سبب افت کمی و کیفی محصول و کاهش بازارپسندی میوه می ­شود. یکی از روش­ هایی که می­ تواند از آلودگی میوه­ها جلوگیری نماید، ممانعت از تخم گذاری شب ­پره و در نتیجه جلوگیری از ورود لاروهای آفت به داخل میوه است. در این تحقیق، زمان ­های مختلف پوشش­ گذاری (شامل زمان­ های 2، 4 و 8 هفته پس از...

متن کامل

کاربرد راهبرد راندن و ربودن push-pull در مبارزه با کرم گلوگاه انار Ectomyelois ceratoniae Zell و بهینه سازی آن در شرایط باغ های انار یزد

اناریکی از محصولات مهم باغی بوده و ایران سهم عمده­ ای از تولید جهانی را در برمی­ گیرد. کرم گلوگاه انار، (Ectomyelois ceratoniae Zell. (Lep.: Pyralidae مهم‌ترین عامل کاهش کمی و کیفی درختان انار می­ باشد. جهت بررسی اثر عصاره صمغ آنغوزه و فرومون جنسی طبیعی در قالب راهبرد رانش-ربایش (push-pull) بر خسارت این آفت، این پژوهش در سال­ های 1389-1390 در باغ انار مرکز تحقیقات کشاورزی یزد روی رقم ملس یزدی د...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید

ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده

{@ msg_add @}


نوع سند: پایان نامه

وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه گیلان - دانشکده کشاورزی

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023